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P/Q-type Ca++ CP α1A双切口酶质粒(h) | sc-404267-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P/Q-type Ca++ CP α1A双切口酶质粒(h2) | sc-404267-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNA1A 编码 P/Q 型电压门控钙通道(CaV2.1)的 α1A 成孔亚基,是介导神经元活动依赖性 Ca2+ 内流的关键因子。通道开放将膜去极化与神经递质释放相耦联,并通过调控突触前钙微域和突触小泡胞吐来塑造放电模式。CaV2.1 的活性还与多种钙依赖性信号通路整合,包括钙调蛋白依赖性调制以及下游激酶/磷酸酶网络,从而精细调控突触可塑性。CACNA1A 的遗传变异或功能异常与以兴奋性和突触传递改变为特征的神经系统疾病表型相关,因此常用于神经环路功能的机制研究。
P/Q-type Ca++ CP α1A 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 CACNA1A 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对CACNA1A内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏CACNA1A的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了CACNA1A基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。