P/Q-type Ca++ CP α1A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419400
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- P/Q-type Ca++ CP α1A Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico P/Q-type Ca++ CP α1A, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: P/Q-type Ca++ CP α1A Antibody (C-2): sc-390004
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
P/Q-type Ca++ CP α1A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-419400 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Cacna1a codifica la subunità α1A che forma il poro del canale del calcio voltaggio-dipendente di tipo P/Q (CaV2.1), una via principale per l’ingresso di Ca2+ nei neuroni dipendente dall’attività. CaV2.1 accoppia la depolarizzazione di membrana all’esocitosi delle vescicole sinaptiche, modulando la probabilità di rilascio dei neurotrasmettitori, la plasticità a breve termine e l’eccitabilità dei circuiti attraverso vie di segnalazione dipendenti dal Ca2+. La funzione del canale è integrata con le proteine presinaptiche della zona attiva e con i sensori di Ca2+ a valle che regolano l’ancoraggio e la fusione delle vescicole. Alterazioni genetiche e funzionali di CACNA1A/CaV2.1 sono state associate a fenotipi neurologici caratterizzati da trasmissione sinaptica modificata e instabilità di rete, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici di neurofisiologia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO P/Q-type Ca++ CP α1A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cacna1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cacna1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cacna1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina P/Q-type Ca++ CP α1A.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cacna1a per lo studio della segnalazione di P/Q-type Ca++ CP α1A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Cacna1a critici per la funzione di P/Q-type Ca++ CP α1A
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cacna1a per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal P/Q-type Ca++ CP α1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal P/Q-type Ca++ CP α1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cacna1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal P/Q-type Ca++ CP α1A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR P/Q-type Ca++ CP α1A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cacna1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cacna1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.