P/Q-type Ca⁺⁺ CP α1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419400

概要

Cacna1a は、P/Q 型電位依存性カルシウムチャネル（CaV2.1）を構成する孔形成性の α1A サブユニットをコードしており、神経細胞における活動依存的な Ca2+ 流入の主要な経路です。CaV2.1 は膜の脱分極をシナプス小胞のエキソサイトーシスに結び付け、Ca2+ 依存性シグナル伝達経路を介して神経伝達物質放出確率、短期可塑性、ならびに回路の興奮性を調節します。チャネル機能は、シナプス前終末のアクティブゾーンタンパク質や、下流の Ca2+ センサー（小胞のドッキングと融合を制御する因子）と統合されて働きます。CACNA1A/CaV2.1 の遺伝学的・機能的な破綻は、シナプス伝達の変化やネットワーク不安定性を伴う神経学的表現型と関連付けられており、神経生理の機序研究における重要な標的となっています。

P/Q-type Ca++ CP α1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCacna1a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cacna1a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cacna1aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、P/Q-type Ca++ CP α1Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、P/Q-type Ca++ CP α1Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cacna1a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• P/Q-type Ca++ CP α1Aの機能に不可欠なCacna1aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cacna1aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• P/Q-type Ca++ CP α1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびP/Q-type Ca++ CP α1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cacna1a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  P/Q-type Ca++ CP α1A HDRプラスミド（m）および P/Q-type Ca++ CP α1A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCacna1aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCacna1a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。