Ox40 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423560-ACT

マウスのTnfrsf4は、主に活性化T細胞および一部の制御性T細胞サブセットに発現する、誘導性TNFRスーパーファミリー共刺激受容体であるOX40（CD134）をコードする。OX40はOX40Lとの結合により、NF-κB、MAPK、PI3K–AKT経路へ収束するTRAF依存性シグナル伝達を介して、クローン増殖、生存、エフェクター分化を促進し、サイトカイン産生とメモリー形成を支持する。OX40シグナルの破綻は炎症・自己免疫プロセスに関与するとともに、T細胞の持続性や免疫抑制ネットワークを変化させることで腫瘍免疫のコンテクスト（腫瘍免疫環境）を形成する。このため、Tnfrsf4はマウス疾患モデルにおいて、T細胞活性化の閾値、胚中心反応の支持、免疫微小環境のリモデリングの観点から広く研究されている。

Ox40 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Tnfrsf4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ox40 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Tnfrsf4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTnfrsf4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ox40の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTnfrsf4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOx40依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTnfrsf4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOx40経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。