OSMR β Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402700-LAC

OSMR β (recettore beta dell’oncostatina M) è una subunità recettoriale transmembrana per citochine che forma complessi di segnalazione con gp130 per mediare le risposte alla citochina della famiglia dell’IL-6 oncostatina M. Il legame del ligando attiva le vie JAK/STAT, MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenzando la differenziazione delle cellule epiteliali e stromali, i programmi trascrizionali infiammatori e il rimodellamento tissutale. La segnalazione dipendente da OSMR β è spesso studiata in contesti di infiammazione cronica e fibrosi, oltre che nelle interazioni tra tumore e microambiente che regolano l’invasione e la dinamica della matrice extracellulare. In quanto recettore di superficie cellulare con output specifici di via, OSMR è comunemente utilizzato per indagare le reti trascrizionali guidate dalle citochine e il cross-talk con la segnalazione dei fattori di crescita.

Le particelle di attivazione lentivirale OSMR β (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di OSMR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale OSMR β (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione OSMR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di OSMR β. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo OSMR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.