OSCP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404116-ACT

ATP5OはOSCP（オリゴマイシン感受性付与タンパク質）をコードしており、OSCPはミトコンドリアF1Fo-ATP合成酵素の中核サブユニットの一つです。周辺ステーク（peripheral stalk）を安定化し、酸化的リン酸化においてプロトン駆動力をATP産生へと結び付けます。OSCPは、電子伝達系に連動した効率的なATP産生を支えることで、細胞のバイオエネルギー、ミトコンドリア膜電位の維持、ならびに栄養や酸素の利用可能性に応じた代謝適応に寄与します。ATP合成酵素の組み立てや制御が乱れると、レドックスバランスが変化し、ミトコンドリアのストレスシグナル伝達が促進される可能性があり、神経変性、心代謝機能障害、がんに伴う代謝リプログラミングの研究とも関連します。OSCPは核コードのミトコンドリアタンパク質であるため、呼吸に影響するミト核間協調やプロテオスタシス経路を解析する上でも有用な手がかりとなります。

OSCP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATP5Oの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OSCP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATP5O 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATP5O転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OSCPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATP5O遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOSCP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATP5O発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOSCP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。