ORP-8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405318-ACT

OSBPL8は、オキシステロール結合タンパク質関連タンパク質8（ORP-8）をコードしており、ORP-8は脂質輸送およびステロール感知に関わる因子として、膜接触部位（とくに小胞体と他のオルガネラ間）における細胞内コレステロールおよびリン脂質の分布制御を協調的に担う。ORP-8は、脂質代謝、膜組成、ならびにホスホイノシチドの制御や小胞輸送に関連するシグナル伝達過程の調節に寄与し、栄養状態やストレス条件の変化に応じた細胞恒常性の形成に関与する。ORP-8活性の変化は、脂質取り扱いの破綻や炎症性シグナル伝達の異常を伴う状況で研究されており、これらは代謝性疾患・心血管疾患の病態や、腫瘍に伴う代謝リモデリングにも深く関与することが多い。したがってヒト細胞モデルにおいてORP-8を操作することは、増殖、ストレス応答、オルガネラ間コミュニケーションに影響する脂質駆動性経路間クロストークの解明に有用である。

ORP-8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OSBPL8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ORP-8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OSBPL8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOSBPL8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ORP-8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOSBPL8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるORP-8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOSBPL8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるORP-8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。