ORMDL3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403587-ACT

ORMDL3（オロソムコイド様3）は小胞体膜タンパク質で、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ（SPT）活性を調節することでスフィンゴ脂質恒常性の主要な制御因子として機能し、結果としてセラミド産生や膜脂質組成に影響を与えます。小胞体における脂質代謝の役割を通じて、ORMDL3はカルシウムシグナル、小胞体ストレス応答、炎症経路の基調（トーン）に作用し、細胞の恒常性と免疫活性化を結び付けます。ORMDL3の遺伝的変異や発現異常は、喘息感受性やその他の炎症性表現型と関連することが報告されており、気道生物学および免疫代謝における重要性を支持しています。研究者は、脂質駆動性シグナル伝達や小胞体プロテオスタシスがサイトカイン応答、上皮機能、ストレス適応プログラムをどのように形成するかを理解するために、ORMDL3を対象として解析することが一般的です。

ORMDL3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ORMDL3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ORMDL3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ORMDL3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はORMDL3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ORMDL3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のORMDL3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるORMDL3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびORMDL3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるORMDL3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。