OR2A1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417340-ACT

ヒトOR2A1は、クラスA GPCRファミリーに属する嗅覚受容体をコードしており、嗅覚Gタンパク質シグナル伝達と共役して、におい物質によって誘発される感覚トランスダクションを調節します。リガンド結合により、OR2A1は通常、アデニル酸シクラーゼ–cAMP経路を介して環状ヌクレオチド依存性（CNG）イオンチャネルの活性や、その下流の神経興奮性プログラムを調節します。嗅上皮で最もよく特徴づけられている一方で、嗅覚受容体の転写産物は多様な末梢組織でも報告されており、異所性GPCRシグナル伝達や文脈依存的な転写制御の研究が進められる契機となっています。組織や疾患状態による発現パターンの変化から、OR2A1は細胞モデルにおける感覚系GPCR遺伝子の制御や化学感覚関連表現型を検討するための有用なマーカー遺伝子となっています。

OR2A1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OR2A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OR2A1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OR2A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOR2A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OR2A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOR2A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOR2A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOR2A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOR2A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。