OPG/Osteoprotegerin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400497-NIC

TNFRSF11B は、TNF 受容体スーパーファミリーに属する分泌型デコイ受容体であるオステオプロテゲリン（OPG）をコードしており、RANKL（TNFSF11）および TRAIL（TNFSF10）に結合することで、リガンドの利用可能性と下流シグナル伝達を調節する。OPG は RANK–RANKL 相互作用に拮抗することにより、破骨細胞の分化と活性を制御し、骨リモデリングと免疫クロストークを司る NF-κB および MAPK 経路の出力と統合される。骨格生物学にとどまらず、OPG は血管石灰化や内皮-平滑筋間シグナル伝達にも関与するとされ、炎症と組織恒常性の接点における役割を反映している。TNFRSF11B 発現の異常や OPG/RANKL バランスの変化は、骨密度表現型、骨溶解性プロセス、ならびにトランスレーショナル研究に関連する石灰化血管疾患の機序と関連づけられている。

OPG/Osteoprotegerin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TNFRSF11B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TNFRSF11B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TNFRSF11Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TNFRSF11Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。