OPG/Osteoprotegerin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400497-ACT

TNFRSF11B は、TNF 受容体スーパーファミリーに属する分泌型のデコイ受容体であるオステオプロテゲリン（OPG）をコードしており、RANKL（TNFSF11）に結合して RANK–RANKL シグナル伝達を抑制することで、破骨細胞の分化および骨リモデリングを調節します。OPG は RANKL や関連リガンドを捕捉（隔離）することにより、破骨細胞前駆細胞における下流の NF-κB および MAPK 経路の活性化に影響を与え、さらに骨芽細胞と破骨細胞の活動のカップリングにも寄与します。骨格生物学にとどまらず、OPG はサイトカインシグナルや細胞外微小環境からの刺激の調節を介して、血管系および免疫関連プロセスにも関与すると示唆されています。TNFRSF11B/OPG 発現の制御異常は骨代謝回転の変化を伴う表現型と関連し、骨粗鬆症、溶骨性疾患の機序、ならびに石灰化に関連する病態生物学などの文脈で研究されています。

OPG/Osteoprotegerin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TNFRSF11Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OPG/Osteoprotegerin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TNFRSF11B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTNFRSF11B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OPG/Osteoprotegerinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTNFRSF11B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOPG/Osteoprotegerin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTNFRSF11B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOPG/Osteoprotegerin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。