Partículas Lentivirales de Activación (m) Olfr291: sc-434560-LAC

Olfr291 codifica un receptor olfativo murino (Olfr291) dentro de la superfamilia de GPCR de clase A tipo rodopsina, conocido principalmente por detectar ligandos odorantes en el epitelio olfatorio. Tras la unión del ligando, los receptores olfativos se acoplan a la señalización mediada por proteínas G para estimular la adenilil ciclasa, elevar el AMPc y abrir canales iónicos regulados por nucleótidos cíclicos, modelando en última instancia la excitabilidad de las neuronas sensoriales y los programas de transcripción inducidos por olores. Más allá de la función sensorial, se ha descrito la expresión ectópica de genes de receptores olfativos en distintos tejidos de manera dependiente del contexto, lo que impulsa estudios sobre la señalización impulsada por GPCR, la identidad celular y las señales del microambiente. La desregulación de las redes de GPCR olfativos es relevante para los mecanismos de disfunción olfatoria y proporciona un modelo manejable para investigar la transducción de señales de GPCR y la regulación génica en sistemas murinos.

Las partículas de activación lentiviral Olfr291 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Olfr291 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Olfr291 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Olfr291, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Olfr291. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Olfr291 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.