Olfr291 Lentiviral Activation Particles (m): sc-434560-LAC

Olfr291は、ロドプシン様クラスA GPCRスーパーファミリーに属するマウス嗅覚受容体（Olfr291）をコードしており、嗅上皮において匂い物質リガンドを検知することで最もよく知られています。リガンドが結合すると、嗅覚受容体はGタンパク質シグナル伝達に共役してアデニリルシクラーゼを活性化し、cAMPを増加させ、環状ヌクレオチド依存性（CNG）イオンチャネルを開口させます。その結果、感覚ニューロンの興奮性や、匂い刺激によって誘導される転写プログラムが形成されます。感覚機能にとどまらず、嗅覚受容体遺伝子の異所性発現が組織横断的に文脈依存的に生じることが報告されており、GPCR駆動のシグナル伝達、細胞アイデンティティ、微小環境からの手掛かりを研究する動機となっています。嗅覚GPCRネットワークの制御異常は嗅覚障害の機序に関与し、マウス系におけるGPCRシグナル伝達および遺伝子制御を検討するための扱いやすいモデルを提供します。

Olfr291 レンチウイルス活性化粒子（m）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なOlfr291の発現上昇を可能にします。

Olfr291 レンチウイルス活性化粒子（m）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、Olfr291転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性Olfr291の発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のOlfr291ゲノム座および制御機構を維持します。

レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。