OIP106 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406170

Panoramica

TRAK1 codifica OIP106, un adattatore citoplasmatico coinvolto nell’organizzazione del trasporto intracellulare collegando i carichi ai complessi motori basati sui microtubuli. OIP106 è stato associato al traffico e al posizionamento dei mitocondri, processi che influenzano la polarità neuronale, il trasporto assonale e la bioenergetica cellulare. Attraverso questi ruoli, TRAK1 viene studiato in vie che regolano la dinamica degli organelli, l’organizzazione del citoscheletro e le risposte allo stress che modellano la sopravvivenza e la differenziazione cellulare. La disregolazione del trasporto degli organelli e della distribuzione mitocondriale è rilevante per la ricerca sui meccanismi delle malattie del neurosviluppo e neurodegenerative e di altri disturbi caratterizzati da un’alterata energetica cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OIP106 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRAK1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRAK1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRAK1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OIP106.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRAK1 per lo studio della segnalazione di OIP106, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TRAK1 critici per la funzione di OIP106
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRAK1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OIP106 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal OIP106 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRAK1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OIP106 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR OIP106 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRAK1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRAK1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.