OBSL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407284-ACT

OBSL1（obscurin-like protein 1）は、アクチン‐ミオシンネットワークと結合し、細胞内の構造的な組織化やメカノトランスダクションに寄与する大型の細胞骨格アダプタータンパク質をコードします。細胞形状の維持、接着動態、ならびに遊走や組織の恒常性に影響する細胞骨格リモデリング過程に関与すると考えられています。OBSL1は、シグナル伝達やスキャフォールド（足場）複合体の形成を協調させるタンパク質間相互作用ネットワークに参加し、細胞骨格アーキテクチャを、増殖や分化を制御するより広範な制御経路と結び付けます。OBSL1の遺伝学的な破綻は3M症候群および関連する成長表現型と関連しており、細胞骨格に連動した発生メカニズムや、疾患関連の細胞ストレス応答を調べる上で重要です。

OBSL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OBSL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OBSL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OBSL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOBSL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OBSL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOBSL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOBSL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOBSL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOBSL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。