OATP-H Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404706-ACT

O SLCO4C1 humano codifica a OATP-H, um polipeptídeo transportador de ânions orgânicos da superfamília dos transportadores de solutos (SLC) que medeia a captação, independente de sódio, de diversos metabólitos endógenos e de compostos do tipo xenobiótico através de membranas celulares. Ao regular o influxo celular e a distribuição de ânions orgânicos anfipáticos, a OATP-H contribui para a homeostase metabólica dirigida por transportadores e influencia a exposição dos tecidos a pequenas moléculas circulantes. Os padrões de expressão do SLCO4C1 e a atividade do transportador se cruzam com vias que governam a desintoxicação, as respostas ao estresse celular e o processamento farmacocinético em contextos de barreira e excreção. Alterações na regulação do SLCO4C1 têm sido investigadas em relação a fenótipos renais e cardiometabólicos e como modificadoras da suscetibilidade específica de tecidos a estressores químicos e inflamatórios.

OATP-H O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLCO4C1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OATP-H O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLCO4C1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLCO4C1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OATP-H. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLCO4C1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OATP-H no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OATP-H em células tumorais com expressão de SLCO4C1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.