OAS2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404302-ACT

L’OAS2 umano (2′-5′-oligoadenilato sintetasi 2) è un enzima indotto dall’interferone che rileva l’RNA virale a doppio filamento e catalizza la sintesi di oligoadenilati legati 2′-5′, i quali attivano RNase L promuovendo la degradazione dell’RNA virale e cellulare. Questo asse OAS2–RNase L è un componente fondamentale della difesa antivirale innata e modella i programmi infiammatori e di risposta allo stress a valle, intersecandosi con la segnalazione dell’interferone di tipo I e con le vie dei recettori di riconoscimento dei pattern. Alterazioni dell’attività di OAS2 e delle sue firme di espressione sono state associate a risposte interferoniche disregolate implicate nella suscettibilità alle infezioni virali, nell’infiammazione cronica e in fenotipi autoimmuni. Di conseguenza, OAS2 è spesso studiato nelle interazioni ospite–patogeno, nelle reti trascrizionali guidate dalle citochine e nella regolazione della segnalazione immunitaria dipendente dal decadimento dell’RNA.

OAS2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di OAS2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OAS2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus OAS2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione OAS2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OAS2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus OAS2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OAS2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OAS2 nelle cellule tumorali con espressione di OAS2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.