Nup155 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405347-ACT

NUP155は、核膜孔複合体（NPC）の中核構成要素であるNup155をコードしており、核膜の構造的完全性の維持と、核と細胞質の間におけるタンパク質およびRNAの選択的輸送に寄与します。Nup155は、核—細胞質間輸送、NPCの組み立て、ならびに細胞周期に連動した核膜の再編成に関与し、これらの過程は遺伝子発現制御や細胞恒常性に影響を及ぼします。核膜孔機能の破綻は、制御された核内移行／核外移行に依存するRNAプロセシングやシグナル伝達ネットワークを撹乱し得ます。またNUP155は、心臓の伝導異常など、核内輸送障害に関連するヒト疾患の文脈や、より広範な核膜関連病態とも関連づけられています。こうした特徴から、NUP155は、NPCの構造が転写プログラムやストレス応答をどのように形成するかを研究するうえで有用な標的となります。

Nup155 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NUP155の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nup155 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NUP155 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNUP155転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nup155の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNUP155遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNup155依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNUP155発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNup155経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。