NR5A2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424058-ACT

O gene murino Nr5a2 codifica o receptor nuclear NR5A2 (LRH-1), um fator de transcrição de ligação ao DNA que regula programas que controlam o metabolismo de lipídios e ácidos biliares, a esteroidogênese e a diferenciação epitelial. O NR5A2 integra sinais para coordenar redes transcricionais envolvidas na especificação do desenvolvimento e na homeostase tecidual, incluindo vias relacionadas à regulação metabólica e a respostas inflamatórias. No pâncreas e no intestino, o NR5A2 influencia a função exócrina e a renovação epitelial, e a alteração da atividade de NR5A2 tem sido associada a fenótipos metabólicos e a estados transcricionais oncogênicos em tecidos gastrointestinais. Essas propriedades tornam o Nr5a2 um alvo útil para dissecar a regulação gênica dirigida por receptores nucleares, o controle transcricional dependente de cromatina e programas de linhagem específicos do contexto em sistemas de modelos murinos.

NR5A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nr5a2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NR5A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nr5a2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nr5a2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NR5A2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nr5a2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NR5A2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NR5A2 em células tumorais com expressão de Nr5a2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.