NR2E1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423422-ACT

Nr2e1 codifica o NR2E1 (TLX), um fator de transcrição recetor nuclear órfão que mantém a autorrenovação de células estaminais e progenitoras neurais e regula o equilíbrio entre proliferação e diferenciação durante o desenvolvimento do prosencéfalo. O NR2E1 integra programas transcricionais que governam a progressão do ciclo celular, a neurogénese e a repressão génica dependente da cromatina, influenciando a padronização cortical e o desenvolvimento da retina. Em modelos de rato, alterações na atividade de Nr2e1 estão associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento que afetam a estrutura e o comportamento do cérebro, sustentando a sua relevância para vias que controlam a especificação de linhagens neurais. Assim, este gene é amplamente utilizado para investigar redes regulatórias subjacentes à manutenção de células estaminais, à maturação neuronal e ao controlo transcricional específico de tecidos.

NR2E1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nr2e1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NR2E1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nr2e1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nr2e1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NR2E1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nr2e1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NR2E1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NR2E1 em células tumorais com expressão de Nr2e1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.