NPT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402216

概要

SLC34A1 は、ヒトの Na⁺ 依存性リン酸輸送体 2A（NPT2）をコードしている。NPT2 は上皮細胞の頂端膜に局在する共輸送体で、Na⁺ 勾配に共役して無機リン酸を起電性に取り込む働きを担う。NPT2 はリン酸恒常性を規定する主要因子であり、腎近位尿細管における再吸収経路に関与して、ビタミン D 代謝、副甲状腺ホルモン（PTH）シグナル伝達、ならびに FGF23 によって調節されるリン酸取り扱いと交差する。SLC34A1 の機能変化は、腎結石、低リン血症、石灰化（ミネラリゼーション）の異常に関連する表現型を含むリン酸バランス異常疾患と関連づけられており、上皮輸送の制御や代謝シグナル伝達の研究対象として重要である。細胞レベルでは、SLC34A1 の攪乱を用いて、膜輸送（トラフィッキング）、輸送体の反応速度論、ならびにリン酸依存的なエネルギー代謝・生体鉱物代謝の制御を解析できる。

NPT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC34A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC34A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC34A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NPT2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NPT2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC34A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NPT2の機能に不可欠なSLC34A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC34A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NPT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNPT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC34A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NPT2 HDRプラスミド（h）および NPT2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC34A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC34A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。