NPT2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402216-ACT

SLC34A1 は、ヒトのナトリウム依存性リン酸輸送タンパク質 NPT2（NaPi-IIa）をコードしており、腎近位尿細管上皮の管腔側（アピカル）膜に存在する主要な輸送体として、ナトリウム勾配に共役して無機リン酸の再吸収を担います。NPT2 はリン酸の取り扱いを制御することで全身のリン酸恒常性に寄与し、PTH および FGF23 に関連する経路を含む、ミネラル代謝を形作る内分泌調節因子やシグナル伝達ネットワークとも連携します。SLC34A1 の発現量や活性の変化は、腎性リン酸喪失（リン酸 wasting）表現型や、腎結石、骨の石灰化（骨ミネラル化）、腎尿細管機能障害に関係するカルシウム—リン酸バランスのより広範な破綻と関連づけられています。細胞・組織モデルでは、SLC34A1 は近位尿細管の分化、トランスポーターのトラフィッキング、ならびに上皮の極性に依存した栄養取り込みの指標（リードアウト）として用いられます。

NPT2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC34A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NPT2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC34A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC34A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NPT2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC34A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNPT2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC34A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNPT2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。