NPRL2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402875-ACT

ヒトNPRL2はGATOR1複合体の中核コンポーネントをコードしており、アミノ酸の利用可能性を細胞増殖の制御へと結び付ける、mTORC1シグナル伝達の主要な負の制御因子である。NPRL2はmTORC1活性の抑制を促すことで、栄養ストレス応答、オートファジー制御、代謝恒常性を支え、タンパク質合成および細胞周期進行に影響を及ぼす。NPRL2の発現や機能の変化は、異常増殖やストレス適応がみられる多様な状況で観察されるmTOR経路活性の破綻と関連付けられており、増殖制御の機構研究において重要である。NPRL2はまた、栄養感知回路と、その下流で細胞の生存および生合成能を形作る転写プログラムを解析するためのノードとしても用いられる。

NPRL2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NPRL2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NPRL2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NPRL2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNPRL2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NPRL2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNPRL2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNPRL2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNPRL2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNPRL2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。