NPAT Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-434105-ACT

O gene **Npat** de camundongo codifica a **NPAT**, um cofator nuclear que conecta a progressão do ciclo celular à transcrição de genes de histonas e à dinâmica da cromatina. A NPAT é ativada a jusante de ciclina E/CDK2 e se localiza nos *histone locus bodies* (corpos do locus de histonas), onde sustenta a expressão de histonas dependentes de replicação acoplada à fase S e coordena a replicação do DNA e a manutenção do genoma. Por meio dessas funções, a NPAT contribui para vias que regulam a transição G1/S, a incorporação de nucleotídeos e a montagem da cromatina — processos comumente alterados em estresse proliferativo e em mudanças de estado celular associadas a doenças. Assim, modular a expressão de **Npat** é útil para investigar como a sinalização do ciclo celular se integra a programas transcricionais que controlam a estabilidade do genoma.

NPAT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Npat sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NPAT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Npat em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Npat, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NPAT. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Npat nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NPAT no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NPAT em células tumorais com expressão de Npat silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.