Nox4 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-424443-ACT-2

マウスのNox4（NADPHオキシダーゼ4）遺伝子は、恒常的に活性化してROSを産生する酵素をコードしており、主として過酸化水素を生成することで、多様な細胞種におけるレドックスシグナル伝達を形成する。NOX4由来の活性酸素種はTGF-β/SMAD、MAPK、PI3K–AKT、NF-κBなどの経路を調節し、分化、細胞外マトリックスのリモデリング、アポトーシス、ストレス応答といった過程に影響を与えるほか、血管生物学、腎機能、線維芽細胞の活性化において重要な役割を担う。Nox4活性の異常は、マウスモデルにおいて線維化、高血圧および血管リモデリング、代謝異常、炎症性組織障害に関連する実験的表現型と結び付けられている。Nox4の遺伝子編集は、区画化されたROSシグナル伝達の機序解明、レドックス依存的な転写プログラムの検証、ならびに疾患関連の細胞系およびin vivo系におけるNOX4の寄与の実証を可能にする。

Nox4 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Nox4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nox4 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Nox4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNox4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nox4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNox4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNox4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNox4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNox4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。