nov Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402642-ACT

O NOV humano (nephroblastoma overexpressed; CCN3) codifica a proteína matricelular secretada nov, um membro da família CCN que modula a comunicação célula–matriz e a sinalização de fatores de crescimento. A nov influencia a remodelação da matriz extracelular, a adesão e migração celulares e programas de diferenciação por meio de interações com integrinas, proteoglicanos de heparan sulfato e vias associadas a TGF-β, Wnt/β-catenina e Notch. Ao moldar microambientes estromais e inflamatórios, a expressão de NOV é frequentemente estudada em contextos de fibrose, reparo tecidual e biologia tumoral. A desregulação de NOV foi relatada em múltiplas neoplasias e distúrbios do tecido conjuntivo, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico para estudos de vias e fenótipos em células humanas.

nov O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOV sem alterar a sequência de ADN subjacente.

nov O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOV em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOV, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de nov. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOV nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de nov no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via nov em células tumorais com expressão de NOV silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.