NOP17 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407256

概要

PIH1D1は、HSP90と協働して大型マクロ分子機械の生合成・安定化・組み立てを促進するR2TP複合体に含まれる、保存性の高いコシャペロンであるNOP17をコードします。NOP17は、box C/D snoRNPの成熟を支援し、リボソーム生合成および核小体の恒常性に寄与するとともに、RNAポリメラーゼIIやPIKK含有シグナル伝達モジュールなどの主要複合体の組み立てを助けます。これらの機能を通じて、PIH1D1はシャペロン介在性の品質管理を、RNAプロセシング、プロテオスタシス、ならびにストレス応答性経路と結び付けています。R2TP/HSP90依存的な組み立て機構やリボ核タンパク質の生合成の破綻は、増殖制御やゲノム維持の表現型の変化と関連づけられており、機序解明を目的とした疾患研究において重要です。

NOP17 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPIH1D1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PIH1D1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PIH1D1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NOP17タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NOP17シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PIH1D1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NOP17の機能に不可欠なPIH1D1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PIH1D1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NOP17 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNOP17 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PIH1D1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NOP17 HDRプラスミド（h）および NOP17 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPIH1D1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPIH1D1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。