NNMT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403192-ACT

ヒトNNMT（ニコチンアミドN-メチルトランスフェラーゼ）は細胞質に存在するメチルトランスフェラーゼで、S-アデノシル-L-メチオニン（SAM）を用いてニコチンアミドおよび関連するピリジン類のN-メチル化を触媒し、異物代謝とメチル供与体ホメオスタシスを結び付けています。SAM/SAHバランスや、ニコチンアミド／NAD⁺に関連する代謝フラックスに影響を与えることで、NNMTはエピジェネティックなメチル化能や、より広範な代謝状態を調節し得ます。NNMTの発現変化は、複数の疾患コンテキストにおいて代謝リプログラミングや細胞分化、ストレス応答の変化と関連していることが報告されており、代謝—エピゲノム連関を研究する上で有用な結節点となります。そのためNNMTは、ワンカーボン代謝、レドックス制御、転写制御に関連する経路でしばしば解析されています。

NNMT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NNMTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NNMT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NNMT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNNMT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NNMTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNNMT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNNMT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNNMT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNNMT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。