NK-2R Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403149

Visão geral

TACR2 codifica o receptor humano de neurocinina-2 (NK-2R), um GPCR de classe A que é ativado por taquicininas como a neurocinina A, acoplando-se principalmente à sinalização Gq/11. A ativação do receptor estimula a fosfolipase Cβ, com produção a jusante de trifosfato de inositol/diacilglicerol, mobilização de Ca²⁺ intracelular e ativação das vias de PKC/MAPK, moldando programas transcricionais e contráteis. O NK-2R é expresso em músculo liso, em tecidos gastrointestinais e respiratórios e em populações neuronais selecionadas, onde regula a motilidade, o tônus das vias aéreas e a sinalização inflamatória neurogênica. A desregulação da sinalização de TACR2 tem sido associada a alterações da responsividade do músculo liso e à modulação de circuitos inflamatórios, o que sustenta seu estudo em modelos de hiper-reatividade das vias aéreas do tipo asma, dismotilidade gastrointestinal e vias de neuropeptídeos relacionadas à dor.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NK-2R (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TACR2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TACR2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TACR2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NK-2R.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TACR2 para a investigação da sinalização de NK-2R, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TACR2 críticos para a função NK-2R
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TACR2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NK-2R Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NK-2R Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TACR2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NK-2R Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NK-2R (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TACR2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TACR2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.