Plásmido CRISPR de Activación (h) Ninjurin-2: sc-408142-ACT

NINJ2 codifica Ninjurin-2, una proteína de adhesión de superficie celular implicada en la señalización dependiente de contacto, la dinámica de membrana y la modulación de la migración celular. Los miembros de la familia Ninjurin se asocian con respuestas a la lesión tisular y a señales inflamatorias, lo que respalda funciones en el tráfico de leucocitos, el crecimiento de neuritas y las interacciones glía–neurona. En estudios genéticos humanos y funcionales, NINJ2 se ha vinculado a fenotipos neurovasculares y neuroinflamatorios, lo que motiva investigar cómo la alteración de la expresión de NINJ2 afecta las respuestas al estrés celular y la comunicación intercelular. Estas propiedades hacen que Ninjurin-2 sea relevante para vías que regulan la adhesión, la señalización inmunitaria y la homeostasis del sistema nervioso.

Ninjurin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NINJ2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ninjurin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NINJ2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NINJ2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ninjurin-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NINJ2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ninjurin-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ninjurin-2 en células tumorales con expresión de NINJ2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.