Nidogen Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421895-ACT

O gene Nid1 de camundongo codifica a nidogena (entactina), uma glicoproteína central da membrana basal que faz a ponte entre as redes de laminina e de colágeno tipo IV, estabilizando a arquitetura da matriz extracelular. A nidogena favorece a adesão célula–matriz, a compartimentalização tecidual e a apresentação de sinais que influenciam vias ligadas a integrinas e a fatores de crescimento, responsáveis por regular migração, polaridade e diferenciação. No sistema nervoso, Nid1 contribui para a integridade das redes perineuronais e da membrana basal vascular, afetando a estabilização sináptica e as interações neurovasculares. Alterações na organização da matriz dependente de nidogena são relevantes em estudos sobre defeitos do desenvolvimento, remodelamento semelhante ao observado em fibrose e comportamento invasivo associado à dinâmica desregulada da matriz extracelular.

Nidogen O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nid1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nidogen O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nid1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nid1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nidogen. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nid1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nidogen no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nidogen em células tumorais com expressão de Nid1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.