Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401641-NIC

CHRNB2は、神経型ニコチン性アセチルコリン受容体（nAChR）のβ2サブユニットをコードしています。nAChRはリガンド作動性イオンチャネルで、他のnAChRサブユニットとヘテロ五量体を形成し、高速なシナプス伝達を担います。アセチルコリンまたはニコチンが結合すると、β2を含む受容体は陽イオンを透過させ、細胞内のNa⁺およびCa²⁺濃度を上昇させます。これにより、活動依存的なシグナル伝達ネットワークと連動して、興奮性、神経伝達物質放出、シナプス可塑性が調節されます。このコリン作動性シグナルは、カルシウム恒常性の制御、MAPK/ERKシグナル伝達、ドパミン作動性回路機能を調節する経路とも交差します。CHRNB2の遺伝的変異や発現変化は、神経精神疾患および神経発達に関わる表現型と関連づけられており、ニコチン依存や発作関連疾患の文脈でも研究されています。

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRNB2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRNB2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRNB2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRNB2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。