Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401641-NIC

CHRNB2 codifica la subunità β2 dei recettori nicotinici neuronali dell’acetilcolina, canali ionici regolati da ligando che si assemblano come eteropentameri con altre subunità nAChR per mediare la trasmissione sinaptica rapida. In seguito al legame di acetilcolina o nicotina, i recettori contenenti β2 conducono cationi, aumentando i livelli intracellulari di Na⁺ e Ca²⁺ e accoppiandosi a reti di segnalazione dipendenti dall’attività che modulano l’eccitabilità, il rilascio di neurotrasmettitori e la plasticità sinaptica. Questa segnalazione colinergica interseca vie che regolano l’omeostasi del calcio, la segnalazione MAPK/ERK e la funzione dei circuiti dopaminergici. Variazioni genetiche o un’espressione alterata di CHRNB2 sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e neuroevolutivi, e il gene è studiato anche nel contesto della dipendenza da nicotina e di disturbi correlati alle crisi epilettiche.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHRNB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHRNB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHRNB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHRNB2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.