Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401605-NIC

CHRNA4は、神経型ニコチン性アセチルコリン受容体（nAChR）のα4サブユニットをコードします。nAChRはリガンド作動性カチオンチャネルとして5量体を形成し、一般にβ2サブユニットと共に組み上がって、高親和性のα4β2受容体を形成します。アセチルコリンまたはニコチンが結合すると、これらの受容体はNa⁺およびCa²⁺の流入を介して、膜興奮性、シナプス伝達、ならびにコリン作動性回路における活動依存的可塑性を調節します。CHRNA4依存的なシグナル伝達は、カルシウム依存性経路や神経伝達物質放出プログラムと交差し、注意、覚醒、報酬に関連する神経ネットワーク機能の形成に関与します。CHRNA4の遺伝学的・機能的な攪乱は、神経精神疾患および神経学的表現型との関連が報告されており、コリン作動性シグナル伝達や受容体生物学の機構研究において重要な標的となっています。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRNA4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRNA4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRNA4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRNA4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。