Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4CRISPR激活质粒(h): sc-401605-ACT

CHRNA4 编码神经元型烟碱乙酰胆碱受体（nAChRs）的 α4 亚基。该类受体组装成配体门控阳离子通道，介导中枢神经系统的快速突触传递。含 α4 的受体常与 β2 形成 α4β2 复合体，可调控膜去极化以及钙依赖性信号传导，从而影响神经递质释放、神经元兴奋性和突触可塑性。通过胆碱能信号，CHRNA4 参与调控注意、觉醒、学习和奖赏相关神经环路等通路；受体功能改变与多种神经精神和神经发育表型相关，包括癫痫易感性和尼古丁依赖。因此，在人源神经元模型中调控 CHRNA4 的表达，有助于研究受体化学计量组成、通道生物物理特性以及活动依赖性的转录程序。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CHRNA4的表达。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CHRNA4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CHRNA4转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CHRNA4位点，并能够研究内源性位点上依赖于Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CHRNA4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。