Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403376-ACT

CHRNA2 codifica a subunidade α2 dos receptores nicotínicos neuronais de acetilcolina (nAChRs), canais catiônicos controlados por ligante que se montam como pentâmeros para mediar a neurotransmissão colinérgica rápida. Após a ligação de acetilcolina ou nicotina, os receptores que contêm CHRNA2 promovem o influxo de Na⁺ e Ca²⁺, influenciando a excitabilidade da membrana e vias de sinalização dependentes da atividade que moldam a plasticidade sináptica e a dinâmica dos circuitos. No sistema nervoso central, alterações na composição de subunidades dos nAChRs podem modular a liberação de neurotransmissores e programas transcricionais a jusante dependentes de cálcio. Mudanças genéticas e de expressão envolvendo CHRNA2 têm sido investigadas no contexto de fenótipos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, nos quais perturbações da sinalização colinérgica estão implicadas na função de redes neuronais relevante para a doença.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHRNA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHRNA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHRNA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHRNA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 em células tumorais com expressão de CHRNA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.