Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401880-NIC

CHRNA1 codifica a subunidade α1 do recetor nicotínico de acetilcolina do tipo muscular, um canal catiónico ativado por ligando essencial para a transmissão sináptica rápida na junção neuromuscular. Após a ligação da acetilcolina, a abertura do recetor promove o influxo de Na⁺ e a despolarização da membrana, que se acopla aos processos de excitação–contração através da ativação subsequente de canais dependentes de voltagem e de sinalização por Ca²⁺. A função de CHRNA1 integra-se com vias de agregação (clustering) e estabilização de recetores pós-sinápticos que envolvem a sinalização agrina–LRP4–MuSK e a montagem dependente de rapsina. Perturbações genéticas ou funcionais deste complexo recetor estão implicadas em síndromes miasténicas congénitas e em defeitos relacionados da transmissão neuromuscular, tornando CHRNA1 um alvo-chave para estudos mecanísticos da fisiologia sináptica e da biogénese de recetores.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CHRNA1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CHRNA1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CHRNA1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CHRNA1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.