Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NHERF-1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404885-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- NHERF-1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- NHERF-1ダブルニカースプラスミド（h）およびNHERF-1ダブルニカースプラスミド（h2）は、SLC9A3R1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: NHERF-1 抗体 (A-7): sc-271552
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
NHERF-1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404885-NIC | 20 µg | $410.00 |
SLC9A3R1は、NHERF-1（Na+/H+交換輸送体調節因子1）をコードしており、PDZドメインを有する足場（スキャフォールド）タンパク質として、細胞膜上で膜受容体、イオン輸送体、シグナル伝達酵素の配置・集合を組織化します。NHERF-1は、NHE3/SLC9A3、CFTR、ならびにGPCR関連複合体などの標的をERMタンパク質およびアクチン細胞骨格に連結することで、上皮のイオン輸送、細胞極性、トラフィッキングを制御します。さらにNHERF-1は、受容体応答性や下流経路の出力を調節する多タンパク質複合体の形成を介して、PI3K/AKTやMAPKを含むキナーゼ駆動型のシグナル伝達ネットワークとも交差します。NHERF-1依存的な足場形成の制御異常は、腎・腸管の生理に関わる上皮恒常性やシグナル伝達挙動の変化、ならびにがん生物学で研究される機構との関連が示されています。
NHERF-1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SLC9A3R1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SLC9A3R1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SLC9A3R1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SLC9A3R1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。