NFκB p50 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400087-ACT

NFKB1は、免疫およびストレス応答における誘導性の遺伝子発現プログラムを制御するNF-κB転写因子ファミリーの中核的なDNA結合構成要素であるNFκB p50サブユニットをコードしています。p50は一般にRELA（p65）とヘテロ二量体を形成するほか、ホモ二量体も形成し、サイトカイン、ケモカイン、接着分子、抗アポトーシス因子などを制御する転写出力を規定します。NFκB p50の活性は、TNF受容体、IL-1/TLR、抗原受容体、DNA損傷シグナルの下流で、IKK依存的にp105がp50へプロセシングされ核内移行することによって統合的に制御されます。NFKB1シグナルの破綻は、慢性炎症、免疫調節異常、腫瘍性の転写プログラム、感染や細胞ストレスに対する応答変化に関与するとされ、経路解析や遺伝子ネットワーク研究で頻繁に標的となります。

NFκB p50 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NFKB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NFκB p50 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NFKB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNFKB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NFκB p50の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNFKB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNFκB p50依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNFKB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNFκB p50経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。