Neurofibromin Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-421861-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- NeurofibrominO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Neurofibromin (m) e o Plasmídeo Double Nickase Neurofibromin (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Nf1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Neurofibromin Anticorpo (H-12): sc-376886
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Neurofibromin Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-421861-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Neurofibromin Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-421861-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O Nf1 de camundongo codifica a neurofibromina, uma proteína ativadora de GTPase de Ras (RasGAP) que reduz a sinalização de RAS ao acelerar a conversão de Ras-GTP ativo em Ras-GDP. Por meio da modulação das vias RAF–MEK–ERK e PI3K–AKT–mTOR, a neurofibromina influencia proliferação, diferenciação, sobrevivência e o desenvolvimento neuronal/glial. O Nf1 também afeta a organização do citoesqueleto e a sinalização dependente de AMPc, conectando sinais de fatores de crescimento a decisões de destino celular. A desregulação da função de NF1 está associada à ativação aberrante da via de Ras e é amplamente estudada em contextos de biologia da predisposição a tumores e de fenótipos do neurodesenvolvimento em modelos murinos.
Neurofibromin O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Nf1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Nf1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Nf1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Nf1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.