netrin-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401871-ACT

ヒトのNTN1は、分泌性のラミニン関連ガイダンス因子であるネトリン-1をコードしており、軸索の経路選択や神経細胞移動を誘導する一方で、上皮細胞および内皮細胞の挙動にも影響を与えます。ネトリン-1はDCCやUNC5ファミリーなどの受容体に結合し、細胞骨格ダイナミクス、接着、生存シグナルを協調的に制御します。その下流効果として、神経突起伸長、バリア機能、血管新生に伴うリモデリングなどの過程が含まれます。発生過程にとどまらず、NTN1の活性は炎症や組織リモデリングの文脈でも研究されており、ネトリン-1発現の変化が白血球のトラフィッキングや血管応答を再構成し得ることが示されています。NTN1シグナルの破綻は、神経発達に関する表現型や腫瘍微小環境の生物学的性質の変化と関連づけられており、多様な細胞システムにおける経路解析のための有用な結節点となっています。

netrin-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NTN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

netrin-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NTN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNTN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性netrin-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNTN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるnetrin-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNTN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるnetrin-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。