Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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nestin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400156-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- nestin Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- nestinダブルニカースプラスミド（h）およびnestinダブルニカースプラスミド（h2）は、NESを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: nestin 抗体 (D-9): sc-377380
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
nestin Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400156-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
nestin Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400156-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NESは、クラスVI中間径フィラメントタンパク質であるネスチンをコードしており、ネスチンは神経幹細胞および前駆細胞に豊富に発現して、増殖・移動・系譜決定の過程で細胞骨格の組織化を支えます。ネスチンは細胞骨格の再編成や細胞周期に連動したプログラムに関与し、Notch、Wnt/β-カテニン、ならびに増殖因子によって駆動されるMAPK/PI3K-AKTシグナル伝達など、幹細胞性と分化を制御する発生シグナル経路からの入力を統合します。その発現は神経上皮性前駆細胞や反応性アストログリアのマーカーとして広く用いられ、組織リモデリングや細胞ストレス応答の際にもしばしば誘導されます。NES発現の異常は分化状態の変化と関連し、複数のがんや神経発生関連の状況で報告されていることから、前駆細胞生物学や疾患に伴う細胞状態遷移の研究において重要です。
nestin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NES 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NES内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NESの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NESが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。