Nek7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425603

Panoramica

Nek7 (NIMA-related kinase 7) è una chinasi serina/treonina che funge da regolatore chiave della progressione mitotica, coordinando l’attività del centrosoma, l’assemblaggio del fuso e la corretta segregazione dei cromosomi. Nelle cellule in proliferazione, la segnalazione di Nek7 sostiene le transizioni del ciclo cellulare e la dinamica dei microtubuli, collegando il controllo mediato da chinasi all’organizzazione del citoscheletro e ai checkpoint che mantengono la stabilità genomica. Nek7 è stata inoltre implicata nella segnalazione dell’immunità innata attraverso la regolazione dell’attivazione dell’inflammasoma NLRP3, mettendo in relazione le chinasi del ciclo cellulare con gli output delle vie infiammatorie. Un’attività o un’espressione deregolata di Nek7 è quindi rilevante per studi su proliferazione aberrante, instabilità cromosomica e fenotipi associati all’infiammazione in sistemi di modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nek7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nek7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nek7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nek7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nek7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nek7 per lo studio della segnalazione di Nek7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nek7 critici per la funzione di Nek7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nek7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nek7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Nek7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nek7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nek7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Nek7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nek7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nek7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.