Nek7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425603-ACT

O Nek7 de camundongo codifica a quinase 7 relacionada à NIMA (NIMA-related kinase 7), uma quinase de serina/treonina que sustenta a progressão mitótica por meio da regulação da função do centrossomo, da dinâmica dos microtúbulos e da montagem do fuso mitótico. A atividade de Nek7 coordena checkpoints do ciclo celular e a capacidade proliferativa, ligando-a a vias que governam a estabilidade cromossômica e a fidelidade da divisão celular. Além da mitose, a NEK7 tem sido implicada na sinalização inflamatória por meio da ativação do inflamassoma NLRP3, conectando o controle citoesquelético dependente de quinase às respostas imunes inatas. Processos associados à NEK7 desregulados são relevantes para estudos de proliferação anormal, instabilidade genômica e patologias associadas à inflamação em sistemas de mamíferos.

Nek7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nek7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nek7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nek7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nek7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nek7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nek7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nek7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nek7 em células tumorais com expressão de Nek7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.