NEIL1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403778-NIC

NEIL1は、エンドヌクレアーゼVIII様1（endonuclease VIII-like 1）をコードしており、フォルムアミドピリミジンやチミングリコールなどの酸化塩基を認識して切り出すことで塩基除去修復（BER）を開始するDNAグリコシラーゼ／APリアーゼです。NEIL1は核ゲノムで機能し、複製フォークでの役割が報告されており、S期におけるゲノム安定性を支えるとともに、DNA複製やクロマチンダイナミクスと修復の協調に関与します。BER経路内での相互作用や、その後に続く修復合成過程を通じて、NEIL1は活性酸素種や内因性DNA損傷により生じ得る突然変異誘発や複製ストレスを抑えるのに寄与します。NEIL1の活性や発現の変化は、研究環境において発がん、神経変性、代謝機能障害に関連する表現型と結び付けられており、酸化DNA損傷の処理がヒト疾患生物学において重要であることを示しています。

NEIL1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NEIL1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NEIL1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NEIL1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NEIL1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。