NDUFV2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403777-ACT

NDUFV2は、ミトコンドリア内膜に存在するミトコンドリア複合体I（NADH：ユビキノン酸化還元酵素）の中核サブユニットをコードしており、NADHから呼吸鎖への電子伝達に寄与します。酸化的リン酸化における役割を通じて、NDUFV2はATP産生、ミトコンドリアのレドックスバランスの維持、ならびにストレスシグナル伝達や代謝適応に影響する活性酸素種（ROS）の制御を支えます。NDUFV2を含む複合体I構成要素の異常はミトコンドリア機能障害の表現型や生体エネルギー状態の変化と関連し、神経変性、心代謝ストレス、その他の電子伝達障害に伴う疾患に関与します。そのためNDUFV2は、ミトコンドリア呼吸、NADH代謝、ミトコンドリア由来の細胞内シグナル伝達を研究するための分子学的な足がかりとして広く用いられています。

NDUFV2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NDUFV2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NDUFV2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NDUFV2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNDUFV2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NDUFV2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNDUFV2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNDUFV2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNDUFV2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNDUFV2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。