Date published: 2026-7-20

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NCK1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402220

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Schede Tecniche
  • Specie Target: human
  • 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
  • NCK1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
  • Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico NCK1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
  • NCK1 HDR Plasmid (h) (sc-402220-HDR) è raccomandato per la cotrasfezione con NCK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) per consentire la selezione delle cellule modificate con successo attraverso l'integrazione mediata da HDR di un cassetto di resistenza alla puromicina e del gene reporter RFP
  • Il NCK1 Plasmid HDR (h) è un pool di plasmidi, ciascuno contenente un modello di riparazione diretta dall'omologia (HDR) corrispondente ai siti bersaglio del gRNA nel NCK1 Plasmid CRISPR/Cas9 KO (h)
  • Ciascun plasmide HDR contiene due bracci di omologia di circa 800 bp che fiancheggiano i cassetti di resistenza alla puromicina e RFP, progettati per legarsi alle sequenze di DNA genomico che circondano il sito di rottura a doppio filamento indotto da Cas9 e facilitare l'integrazione precisa mediata da HDR
  • I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
  • In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NCK1 Antibody (20B.1H9): sc-20026
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    Nome del prodottoCodice del prodottoUNITÀPrezzoQuantitàPreferiti

    NCK1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h)

    sc-402220
    20 µg
    $397.00

    NCK1 Plasmide HDR (h)

    sc-402220-HDR
    20 µg
    $445.00

    Panoramica

    NCK1 umano (non-catalytic region of tyrosine kinase adaptor protein 1) è una proteina adattatrice con domini SH2/SH3 che collega le tirosin-chinasi recettoriali e non recettoriali attivate agli effettori a valle che controllano il rimodellamento del citoscheletro di actina e la trasduzione del segnale. Collegando la segnalazione mediata da fosfotirosina a proteine quali PAK e regolatori della famiglia WASP, NCK1 contribuisce a coordinare vie coinvolte nella migrazione cellulare, nella dinamica dell’adesione, nell’endocitosi e nelle risposte allo stress. La funzione di scaffold mediata da NCK1 interseca reti di segnalazione di fattori di crescita, incluse le cascate associate a EGFR, e contribuisce alla regolazione di processi dipendenti da MAPK e PI3K attraverso l’assemblaggio di complessi multiproteici. La disregolazione di questi moduli di segnalazione è stata implicata in alterazioni della motilità e in fenotipi invasivi nella biologia dei tumori, oltre che in perturbazioni più ampie dell’omeostasi del citoscheletro rilevanti in contesti di sviluppo e infiammatori.

    NCK1 Il plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NCK1 in human linee cellulari. Ogni plasmide del pool co-esprime un sgRNA unico, mirato a un sito distinto all'interno del locus NCK1, insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes, e codifica per la GFP per consentire l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo. Questa strategia multi-guida aumenta la probabilità di indurre spostamenti di lettura o delezioni che producono un knockout funzionale, offrendo un'alternativa più robusta agli approcci a guida singola. Le DSB indotte in più siti vengono risolte tramite giunzione non omologa (NHEJ) o, se utilizzate con il modello donatore HDR incluso, tramite riparazione diretta dall'omologia (HDR) in un sito bersaglio definito all'interno del locus.

    Se utilizzato in combinazione con il donatore HDR che esprime RFP, la fluorescenza GFP e RFP può essere utilizzata insieme per distinguere le popolazioni cellulari trasfettate da quelle modificate, semplificando i flussi di lavoro di selezione e selezione dei cloni basati sulla citometria a flusso.

    Donatore per riparazione diretta dall'omologia (HDR) — Cassetta puromicina con reporter RFP

    Per applicazioni che richiedono cloni knockout confermati e selezionabili, il NCK1 Plasmide HDR (h) include un costrutto donatore HDR contenente una cassetta di resistenza alla puromicina (PuroR) e un reporter proteina fluorescente rossa (RFP), affiancati da bracci di omologia specifici per un sito bersaglio definito NCK1.
    Se cotrasfettato con il NCK1 Plasmide CRISPR/Cas9 KO (h):

    • La cassetta PuroR-RFP si integra nel sito di taglio di Cas9 tramite HDR, interrompendo il frame di lettura aperto NCK1.
      La fluorescenza RFP fornisce un indicatore visivo immediato dell'integrazione riuscita, consentendo l'identificazione o la selezione basata sulla fluorescenza delle cellule modificate prima o parallelamente alla selezione con puromicina.
      Le cellule modificate con successo vengono confermate attraverso la resistenza alla puromicina, riducendo sostanzialmente il carico di screening dei cloni.
      Questa strategia di selezione è ideale per generare linee cellulari KO clonali stabili per studi funzionali a valle, screening farmacologico o sviluppo di modelli.

    Sistema di rimozione della cassetta Cre-lox

    Il costrutto donatore HDR presenta siti loxP che fiancheggiano la cassetta di selezione PuroR-RFP per consentire la rimozione pulita del marcatore dopo la conferma del clone. L'espressione transiente della ricombinasi Cre tramite il vettore Cre incluso : sc-418923 elimina la cassetta, lasciando un sito loxP residuo minimo all'interno del locus NCK1 ed eliminando potenziali effetti confondenti sui saggi a valle.
    Questo approccio in due fasi:

    • Riduce al minimo la perturbazione dell'architettura cromatinica locale e degli elementi regolatori adiacenti
      Ripristina un contesto genomico quasi nativo nel locus modificato
      Consente il riutilizzo della strategia di selezione con puromicina nella stessa linea cellulare per ulteriori modifiche

    Caratteristiche principali

    • gRNA mirato agli esoni NCK1 critici per la funzione NCK1
      Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
      Donore HDR con resistenza alla puromicina per la selezione positiva dei cloni
      Cassetta PuroR fiancheggiata da loxP con vettore ricombinasi Cre per la rimozione senza soluzione di continuità del marcatore
      Fornito pronto all'uso per la somministrazione tramite trasfezione

    Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.