NBK Plasmide Double Nickase (m): sc-419331-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NBK Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NBK Double Nickase Plasmid (m) e il NBK Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Bik. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NBK Plasmide Double Nickase (m) | sc-419331-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NBK Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419331-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Bik codifica NBK, un membro pro-apoptotico “BH3-only” della famiglia BCL-2 che promuove la permeabilizzazione della membrana esterna mitocondriale neutralizzando proteine anti-apoptotiche come BCL-2, BCL-XL e MCL1. Nelle cellule di topo, NBK contribuisce all’apoptosi intrinseca, alla segnalazione di morte legata allo stress del reticolo endoplasmatico e alla regolazione dell’omeostasi tissutale tramite l’attivazione delle caspasi. L’attività di BIK/NBK interseca le risposte allo stress associate a p53 e i checkpoint regolati da BCL-2 che influenzano le decisioni di sopravvivenza cellulare. La disregolazione dell’equilibrio della famiglia BCL-2, inclusa un’alterata espressione di Bik, è spesso studiata in contesti quali trasformazione oncogena, selezione delle cellule immunitarie e modelli di neurodegenerazione in cui la soglia apoptotica risulta perturbata.
NBK Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Bik nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Bik. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Bik. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Bik interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.