Na⁺ CP type Vα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402162-ACT

SCN5A codifica a subunidade α formadora do poro do canal de sódio dependente de voltagem Na⁺ CP tipo Vα (NaV1.5), um determinante fundamental da despolarização rápida e do início do potencial de ação em células excitáveis. Ao mediar correntes de entrada de Na⁺, o NaV1.5 regula a excitabilidade da membrana, a velocidade de condução e o acoplamento da atividade elétrica ao manuseio de Ca²⁺ a jusante e aos processos de excitação–contração. A função de SCN5A integra-se com redes de homeostase iônica e vias de sinalização que influenciam o tráfego do canal, o gating dependente de fosforilação e o remodelamento elétrico responsivo ao estresse. Perturbações genéticas e regulatórias em SCN5A estão associadas à suscetibilidade a arritmias hereditárias e adquiridas, tornando-o um alvo central para estudos mecanísticos da dinâmica da corrente de sódio e de fenótipos ligados à eletrofisiologia.

Na+ CP type Vα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SCN5A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Na+ CP type Vα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SCN5A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SCN5A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Na+ CP type Vα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SCN5A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Na+ CP type Vα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Na+ CP type Vα em células tumorais com expressão de SCN5A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.