Plásmido CRISPR de Activación (m) Na⁺ CP type IIIα: sc-422820-ACT

Scn3a codifica la subunidad alfa del canal de sodio dependiente de voltaje Na+ CP tipo IIIα (Nav1.3), una proteína de membrana formadora de poro que inicia y propaga los potenciales de acción al mediar una rápida entrada de sodio. En neuronas de ratón, Nav1.3 contribuye a la excitabilidad intrínseca y a la temporización de los disparos, interactuando con programas de señalización eléctrica que coordinan la transmisión sináptica y la actividad de las redes neuronales. Las corrientes de sodio reguladas por SCN3A influyen en procesos dependientes de la actividad, como el crecimiento de neuritas y la maduración de circuitos, y se ha vinculado la expresión alterada del canal o cambios en su compuerta con fenotipos del neurodesarrollo y relacionados con convulsiones. Como resultado, Scn3a se estudia ampliamente en modelos de trastornos de la excitabilidad, procesamiento sensorial y diferenciación neuronal.

Na+ CP type IIIα El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Scn3a sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Na+ CP type IIIα El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Scn3a en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Scn3a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Na+ CP type IIIα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Scn3a y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Na+ CP type IIIα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Na+ CP type IIIα en células tumorales con expresión de Scn3a silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.