Na⁺ CP type IIIα Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422820-ACT

Scn3a codifica a subunidade alfa do canal de sódio dependente de voltagem Na+ CP tipo IIIα (Nav1.3), uma proteína de membrana formadora de poro que inicia e propaga potenciais de ação ao mediar um rápido influxo de sódio. Em neurônios de camundongo, o Nav1.3 contribui para a excitabilidade intrínseca e para o timing dos disparos, integrando-se a programas de sinalização elétrica que coordenam a transmissão sináptica e a atividade de redes neuronais. As correntes de sódio reguladas por SCN3A influenciam processos dependentes de atividade, como o crescimento de neuritos e a maturação de circuitos, e alterações na expressão ou na abertura/fechamento (gating) do canal têm sido associadas a fenótipos de neurodesenvolvimento e relacionados a crises epilépticas. Por isso, Scn3a é amplamente estudado em modelos de distúrbios de excitabilidade, processamento sensorial e diferenciação neuronal.

Na+ CP type IIIα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Scn3a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Na+ CP type IIIα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Scn3a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Scn3a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Na+ CP type IIIα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Scn3a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Na+ CP type IIIα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Na+ CP type IIIα em células tumorais com expressão de Scn3a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.