MZF-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403142-ACT

O dedo de zinco mieloide 1 (MZF1/MZF-1) é um fator de transcrição do tipo dedo de zinco C2H2 com domínio KRAB, com papéis de destaque no comprometimento de linhagens hematopoéticas e na diferenciação mieloide. Ele regula programas de expressão gênica que influenciam a progressão do ciclo celular, a apoptose e a migração celular, integrando-se a redes transcricionais mais amplas que controlam a proliferação e respostas ao estresse. A atividade desregulada de MZF1 tem sido associada a estados de diferenciação alterados e a reprogramação transcricional aberrante observada em distúrbios hematológicos e em múltiplos contextos de tumores sólidos. Como regulador de ligação ao DNA, o MZF-1 é frequentemente estudado pelo seu impacto na sinalização oncogênica, no potencial metastático e em circuitos transcricionais específicos de linhagem.

MZF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MZF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MZF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MZF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MZF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MZF-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MZF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MZF-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MZF-1 em células tumorais com expressão de MZF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.