MYH10 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-429543-NIC

Myh10 codifica a cadeia pesada IIB da miosina não muscular (MYH10), um importante motor baseado em actina que gera as forças contráteis necessárias para a citocinese, a migração celular e a manutenção da arquitetura tecidual. A dinâmica actomiosina dirigida por MYH10 regula a adesão e a polaridade celulares por meio da renovação das adesões focais e da remodelação do citoesqueleto dependente de RhoA/ROCK, acoplando a tensão mecânica a saídas de sinalização que moldam a morfogênese. Em sistemas murinos, a atividade de MYH10 está intimamente ligada a programas de desenvolvimento e à organização de tecidos neurais e cardiovasculares, e a desregulação da função da miosina II não muscular tem sido associada a defeitos na divisão celular, motilidade alterada e interações aberrantes com a matriz extracelular relevantes para fenótipos associados a doenças. Essas propriedades fazem de Myh10 um alvo útil para dissecar mecanotransdução, organização do citoesqueleto e regulação da expressão gênica dependente de força.

MYH10 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Myh10 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Myh10. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Myh10. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Myh10 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.