MYBPC2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407591-ACT

MYBPC2 codifica a proteína C ligadora de miosina, tipo rápido, uma proteína sarcomérica associada ao filamento espesso que modula o ciclo de pontes cruzadas actomiosina e estabiliza a organização dos filamentos de miosina no músculo estriado. Por meio de interações com a cadeia pesada de miosina e com a titina, o MYBPC2 contribui para o desempenho contrátil e para a montagem do sarcômero, influenciando a regulação, sensível ao cálcio, do desenvolvimento de força. A expressão alterada ou a desregulação de genes estruturais sarcoméricos, incluindo MYBPC2, é relevante em estudos de remodelamento miofibrilar e de fenótipos de desempenho muscular. Na pesquisa biomédica humana, MYBPC2 é frequentemente investigado no contexto do desenvolvimento muscular, de respostas ao estresse mecânico e de vias que controlam a integridade do sarcômero.

MYBPC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYBPC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYBPC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYBPC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYBPC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYBPC2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYBPC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYBPC2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYBPC2 em células tumorais com expressão de MYBPC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.